Spektrofotometrning umumiy komponentlarining printsipi va qo'llanilishi

Spektrofotometr biologik, kimyoviy, klinik va ekologik tadqiqotlarda keng qo'llaniladi.
Spektrofotometriya kimyoviy nurni spektrofotometrdagi namuna orqali o'tkazish orqali qancha nur olishini o'lchaydi.
Aniqlangan yorug'lik intensivligini o'lchash orqali namunadagi eritmaning konsentratsiyasini aniqlash uchun usuldan foydalanish mumkin.
Spektrofotometriya tushunchasi
Namunaga yuborilgan nur foton nuridan iborat.
Fotonlar namunadagi molekulalarni uchratganda, molekulalar ularning bir qismini singdirishi, nurlardagi fotonlar sonini kamaytirishi va aniqlash signalining intensivligini kamaytirishi mumkin.
O'tkazuvchanlik namunadan o'tgan nurning bir qismidir. Hodisa sodir bo'lgan yorug'lik intensivligida namuna orqali o'tadigan yorug'lik zichligi sifatida aniqlanadi.
Emilim spektrofotometr bilan o'lchanadigan miqdorga mos keladigan o'tkazuvchanlikka teskari.
Absorbsiyaga ko'ra, eritma namunasining kontsentratsiyasini Lambert qonuni asosida aniqlash mumkin, bu changni yutish va namuna kontsentratsiyasi o'rtasida chiziqli bog'liqlik borligini ko'rsatadi. Lambert pivosining qonuniga ko'ra, assimilyatsiya - bu yutish koeffitsienti, ya'ni berilgan to'lqin uzunligida va yorug'lik o'tadigan masofada erituvchi tomonidan so'rilgan yorug'lik miqdori. Namuna yoki sayohat masofasi va eruvchan konsentratsiya. Umuman olganda, changni yutishni o'lchash maqsadi namunaning kontsentratsiyasini o'lchashdir.
Spektrofotometrning tarkibiy qismlari
Har bir spektrofotometr yorug'lik manbai, kollimator (kuchli va to'g'ri nurlarni uzatish uchun linzalar yoki fokusli qurilma), turli xil to'lqin uzunlikdagi nurlarni ajratish uchun monoxromator va istalgan to'lqin uzunligini tanlash uchun uzunlik selektoridan iborat. Ushbu videoda keltirilgan spektrofotometrda ishlatiladigan yorug'likning to'lqin uzunligi ultrabinafsha va ko'rinadigan yorug'lik diapazonida. Spektrofotometr shuningdek namuna ushlagichi, fotodetektor va detektor natijalarini aks ettiruvchi ekranni o'z ichiga oladi.
Eng so'nggi spektrofotometr to'g'ridan-to'g'ri kompyuterga ulanadi, bu erda eksperimental parametrlarni boshqarish va natijalarni ko'rsatish mumkin.
Spektrofotometrning ishlash printsipi
Spektrofotometriyani o'tkazishda siz foydalanadigan biologik yoki kimyoviy eritma turiga qarab qo'lqop kiyish kabi tegishli choralarni ko'rish muhimdir.
Namunaning UV-Vis spektrini o'lchashdan oldin qurilmani yoqing va chiroq va elektronikani qizdiring.
Xuddi shu pH va o'xshash ion kuchiga ega bo'lgan eritmaning bo'sh namunasini tayyorlang, ammo tahlil qilinadigan tarkibiy qismlarsiz; kyuveta va hal qiluvchi yorug'likni tarqatishi mumkinligi sababli, namunani tahlil qilish kerak.
An'anaviy spektrofotometr namunasi ushlagichi plastik va kvarts idishlarini ushlab turish uchun mo'ljallangan. Asl eritmani idishga soling.
Barmoq izlarini artib, idishning tashqi tomoniga sepib bo'lgandan keyin kupitni namuna ushlagichiga to'g'ri joylashtiring va qopqoqning eshigini yoping.
Eshikni yopishni hech qachon unutmang, chunki ochiq spektrofotometrdan tushgan UV nurlari ko'zlaringiz va teringizga zarar etkazishi mumkin.
Namunaga uzatiladigan kerakli to'lqin uzunligi yoki to'lqin uzunligini dasturlang. Bu tahlil qilinayotgan komponent yutishi mumkin bo'lgan eng yaxshi to'lqin uzunligiga bog'liq. Keyin mashina namunaviy tampon tufayli pastki yutilishni oladigan bo'sh namunani o'lchash orqali nolga tushiriladi.
Siz qilayotgan spektrofotometriya eksperiment turiga qarab namunani o'lchashdan oldin standart egri yaratish kerak bo'lishi mumkin, bunda namunada tahlil qilingan aralashmaning kontsentratsiyasini aniqlash mumkin.
Namunani kerakli haroratga etkazing va pufakchalarni kiritmaslik uchun muloyimlik bilan aralashtiring. Keyin namuna to'g'ridan-to'g'ri mashina ichidagi idishga qo'shilishi va o'qilishi mumkin.
Namuna assimilyatsiya qilish uchun o'lchanganidan so'ng, tajriba to'g'ri hisoblanadi; masalan, kontsentratsiya yoki ferment faolligi darajasini aniqlash uchun.
Spektrofotometrni qo'llash
Spektrofotometrning keng tarqalgan ishlatilishlaridan biri bu hujayra zichligini o'lchashdir. Hujayralar zichligini o'lchash bakteriyalarning logarifmik o'sish egri hosil qilish uchun ishlatilishi mumkin, shundan rekombinant oqsilni birlashtirish uchun maqbul vaqtni aniqlash mumkin.
Spektrofotometr kimyoviy reaktsiya tezligini o'lchash uchun ham ishlatilishi mumkin. Ushbu usulda, emilim fermentativ reaktsiyani kuzatish uchun ishlatiladi, bu vaqt o'tishi bilan 452 nm oraliq reaktsiya orqali yo'qoladi. Ushbu enzimatik bosqichning tezligini ma'lumotlarni tegishli tenglama bilan solishtirish orqali hisoblash mumkin.
Mikro spektrofotometrning kiritilishi namuna ushlagichining ehtiyojini yo'q qiladi. Ushbu spektrofotometrlar namunani ushlab turish uchun sirt tarangligidan foydalanadilar.
Mikrospektrofotometr biomolekulalar, shu jumladan oqsillar va nuklein kislotalarni o'z ichiga olgan kichik va qimmat namunalarning massasi va kontsentratsiyasini o'lchash uchun eng yaxshi tanlovdir.
Oqsillarning 280nm-da assimilyatsiya qilinishi triptofan, tirozin va fenilalanin tarkibidagi aromatik yon zanjirlar tarkibiga, shuningdek ikkita sistein o'rtasidagi disulfid aloqasiga bog'liq.
Protein kontsentratsiyasini aminokislotalar tarkibiga asoslangan uning 280nm va uning assimilyatsiya koeffitsienti bilan aniqlash mumkin.
DNK va RNK maksimal yutilish xususiyatiga ega, 260nm, shundan ularning konsentratsiyasini aniqlash mumkin. Nuklein kislotalarning tozaligini, shuningdek, yutish ko'rsatkichlarining ma'lum to'lqin uzunliklariga nisbati bilan ham baholash mumkin.