Spektrofotometrlarda nuklein kislotalarining kantifikatsiyasi
Nuklein kislotalarning miqdori spektrofotometrning eng ko'p ishlatiladigan funksiyasi hisoblanadi . Oligonükleotidlar, bitta torli, ikki barmoqli DNK va RNKlar buferlarda aniqlanishi mumkin. Nuklein kislotasi eng yuqori assimilyatsiya pikining yutilish tepasi 260 nm. Har bir nuklein kislota turli molekulyar birikmalarga ega va shuning uchun turli konveksiya omillari mavjud. Nuklein kislotalarning turli turlarini aniqlash uchun oldindan tegishli koeffitsientlarni tanlang. Masalan, 1OD absorbansi 50 mg / ml dsDNA, 37 mg / ml ssDNA, 40 mg / ml RNK va 30 mg / ml Oligga teng. Sinovdan keyin absorbentlik qiymati yuqoridagi koeffitsientga mos keladigan namuna konsentratsiyasini olish uchun aylanadi. Sinovdan oldin to'g'ri amalni tanlang, aktsiyadorlik eritmasi va seyreltici hajmlarini kiriting va bo'sh va namuna echimlarini sinab ko'ring. Biroq, tajriba oson emas edi. Ishonchsiz o'qishlar tajriba qiluvchilar uchun eng katta bosh og'rig'i bo'lishi mumkin. Qurilmaning sezgirligi qanchalik baland bo'lsa, unda namoyon bo'lgan absorbentsiya tezligi oshadi.
Aslida spektrofotometrenin dizayn printsipi va ish printsipi absorbans qiymatini muayyan doirada o'zgartirishga imkon beradi, ya'ni asbob ma'lum darajada aniqlik va aniqlikka ega. Eppendorf Biophotometer aniqligi ≤ 1.0% (1A) kabi. Ushbu ko'plab testlarning natijalari o'rtacha 1,0% oralig'ida o'zgarib turadi va ularning barchasi normaldir. Bundan tashqari, nuklein kislotasining fizikokimyoviy xususiyatlari, nuklein kislotasini eritib yuboradigan tamponning pH qiymati, ion konsentratsiyasi va hokazolar ham e'tiborga olinishi lozim: sinov davomida juda yuqori ion konsentratsiyasi, shuningdek, o'qishni sezilarli darajada barqarorlashtiradigan TE ga aylanadi. Namunaning suyultirilgan kontsentratsiyasi ham beparvo bo'ladigan omil: namunadagi kichik zarrachalarning muqarrar mavjudligi, ayniqsa nuklein kislota namunalari. Ushbu kichik zarrachalarning mavjudligi test ta'siriga to'sqinlik qiladi. Zarrachalarning sinov natijalariga ta'sirini kamaytirish uchun nuklein kislotasining absorbissiyasini kamida 0,1 A bo'lishi va absorbansning 0,1-1,5 A bo'lishi kerak. Ushbu oraliqda, aralashmasi va bo'shliqda hech qanday to'xtatib bo'lmaydi. Aks holda, o'qishlar zo'ravonlikka aylanadi; namunani va namunani tekshirish uchun bir xil rang o'lchagich idishdan foydalanish kerak; aks holda konsentratsiyaning farqi juda katta; konvertatsiya koeffitsienti va namuna kontsentratsiyasi birligi bir xil; Derazadan kiyadigan kuvetka; namunaning miqdori rangli chashka talab qilinadigan minimal hajmdan ko'p bo'lishi kerak.
Nuklein kislota konsentratsiyasiga qo'shimcha ravishda, spektrofotometr bir vaqtning o'zida namunaning sofligini baholash maqsadida A260 / A280 nisbati kabi namunaning tozaligini ko'rsatish uchun bir nechta juda muhim nisbatlarini ko'rsatadi, chunki oqsilning 280 nm. Sof namunalar 1,8 dan ortiq (DNK) yoki 2,0 (RNK) ga ega. Agar bu nisbat 1,8 yoki 2,0 dan kam bo'lsa, u protein yoki fenolik moddalar mavjudligini ko'rsatadi. A230 misolda uglevodlar, peptidlar, fenollar va hokazolar kabi ifloslantiruvchi moddalar borligini ko'rsatadi. A260 / A230 sof nuklein kislotasi nisbati 2.0 dan yuqori. A320 eritmaning loyqaligi va boshqa aralashuv omillarini aniqlaydi. Sof namuna, A320 odatda 0 ga teng.
Kompaniya spektrofotometrlarni sotishda ixtisoslashgan, maslahat va sotib olish kerak bo'lgan iste'molchilarga xush kelibsiz, biz sizga samimiy xizmat va sifatli mahsulotlarni taqdim etamiz, shuningdek, arzon narxlarni taklif qilamiz.
E-mail: info@sumerlab.com
Veb: sumerinstrument.com